慢性乙型肝炎病毒感染是全球公共卫生领域的一大难题，每年都有数百万患者因此丧生。虽然目前使用的核苷酸类似物能够有效遏制病毒的繁殖，但它们并不能彻底消除病毒，这导致了感染持续存在以及肝癌风险上升的问题。近年来，基因编辑技术的迅猛进步为治愈HBV带来了新的曙光。本刊特别邀请了悉尼大学韦斯特米德医学研究所的Tu教授，为业界同仁详细阐述基因编辑技术在慢性乙型肝炎治疗领域的理论基础，分享该技术的最新研究动态，探讨所遭遇的困难与挑战，并展望其未来的发展趋势。

HBV持续感染的机制

HBV感染的持续关键因素是其特有的生命周期以及其在宿主细胞内整合的过程。据 Tu 等人（2018年）的研究指出，HBV DNA的整合多在双链DNA断裂的位置进行，这一过程大约每10,000个细胞中才会发生一次。整合的乙型肝炎病毒DNA与肝细胞癌（HCC）的生成有着紧密的联系，在超过80%的肿瘤样本中检测到了这种整合的HBV DNA。这些整合的DNA分子能够促进下游基因的转录（即顺式激活），或者编码病毒蛋白（即反式激活），同时还能维持HBsAg的表达，进而影响功能性治愈的几率。

NAs治疗期间的HBV持续性

在NAs治疗过程中，HBV DNA的持续存在和克隆性增殖成为关键问题。根据Tu等人（2022年，《JHEP》）的研究发现，尽管NAs具备抑制病毒复制的功能，但对于整合的HBV DNA的降低效果并不显著，其作用主要是通过抑制克隆的增殖，而非直接减少整合的HBV DNA数量。Chow等人于2023年在《临床疾病》杂志上发表的研究，对NAs治疗过程中HBV整合转录的演变进行了深入探讨。该研究指出，在长期治疗期间，HBV DNA的整合数量呈现下降趋势，而克隆的大小则相对维持了稳定状态。

基因编辑技术的发展与应用

基因编辑技术能够直接对DNA进行切割或碱基编辑，以此对基因序列进行修改。目前，广泛应用的基因编辑工具主要有Cas9、TALEN、ZFN和ARCUS等。这些工具能够直接对HBV的共价闭合环状DNA以及整合的DNA进行作用，进而达到清除病毒的目的。

基因编辑技术的应用

Cas9系统利用引导RNA（gRNA）精准定位特定DNA序列，并对其进行切割，这一技术已在体外模型中成功用于消除HBV病毒DNA。张与屠（2023年，在《肝脏》杂志发表的综述中）对36项乙型肝炎病毒（HBV）研究进行了总结，指出在体外模型（例如转染及流体动力学注射）中观察到的影响较为显著，然而，在所有模型中，这种影响的大小大致相当于1个对数单位。

碱基编辑技术，通过精确修改单个碱基来引发基因序列的特定突变，这种技术对于降低乙型肝炎病毒（HBV）的表达水平展现出了一定的应用前景。据etal.在2024年发表在《分子治疗与核酸》杂志上的研究揭示，尽管碱基编辑技术在HBV治疗领域尚处于临床前研究阶段，它已经展现出了大约一个对数的治疗效果。

表观遗传修饰，它通过调整基因的活性来影响表达，而不对DNA的序列进行任何改变；这种机制或许能够对乙型肝炎病毒（HBV）的转录活动进行有效的调控。

最新临床研究进展

目前，针对慢性乙型肝炎的治疗，多项基因编辑技术的临床试验正在有序推进。比如，已研发的-HBV项目，该技术采用脂质纳米颗粒（LNP）作为递送载体，能够将基因编辑工具有效输送至肝脏细胞。随后，利用/Cas9技术对HBV DNA进行精确切割，进而直接消除并整合病毒DNA。此方法的目的是直接根除病毒，以期达到功能性治愈的效果。

目前，该研究项目已完成了-B I期临床试验的剂量探索阶段，其目的是对-HBV在慢性乙型肝炎患者群体中的安全性及疗效进行评估。在初步的临床试验阶段，-HBV在最小剂量水平上展现出了显著的抗病毒作用（以降低HBsAg水平为衡量标准），同时表现出了良好的安全性和耐受性。这标志着基因编辑技术在慢性乙型肝炎治疗领域首次实现了临床概念验证。未来的研究将持续对该技术进行改良，旨在提升编辑作业的效率和保障其安全性，同时也会致力于寻找与其它抗病毒药物相结合的新的治疗方案。

基因编辑技术的挑战

尽管基因编辑技术在理论层面展现出巨大的发展前景，然而，在具体实施过程中，它依然遭遇了众多难题：

基因编辑技术可能引发HBV DNA转录活性的突变，进而促使病毒变异和耐药性增强。此类变异现象不仅会削弱治疗效果，还可能使治疗过程变得更加复杂。

基因编辑环节可能引发HBV DNA的整合及移位现象dnastar lasergene，从而提升了基因组不稳定性的潜在风险。据et al. (2022, )的研究揭示dnastar lasergene，在采用ARCUS核酸酶针对HBV聚合酶的感染模型中，脱靶效应以及目标区域的切割作用均有可能导致HBV DNA的整合和移位。

效应评估方面，精确衡量基因编辑对DNA整合所产生的作用是一项技术挑战。目前通用的检测手段普遍存在灵敏度不足的问题，往往难以察觉到细微的变动。

递送挑战显著，关键在于如何将基因编辑技术安全高效地送入肝脏细胞。尽管目前采用的递送系统（例如LNP）已取得一定成就，但仍有必要对其进行优化，以增强其递送效率和确保使用安全。

未来展望

为了实现 HBV 的根治，未来的研究应集中在以下几个方面：

提升编辑效能，通过研发更先进的基因编辑技术和输送体系，旨在增强编辑作业的效率和确保其安全性。

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