最近因为之前的测序公司既不好又马虎，秉着“忍不了就常换”的原则，我决定换一家公司试试。

在适应新公司的样本交付方式、测序结果等过程中，我学到了一些东西，这就是我今天要分享的两点：

1、最常用的核酸检测技术：双脱氧终止法 2、最实用的技巧：测序结果的序列拼接

首先我们来说说这种双脱氧终止方法是如何引起我的注意的？

当我在看一家新公司的测序软件使用说明时，看到这样一句话（红色的那句话）：

让我想起有一次我和老师或者学长讨论实验时经常被问到：

为什么您的引物序列不包含在测序结果中？

这就要从双脱氧终止法的原理说起……

具体来说，emm 等人。 1977年提出了这种测序方法，其原理是：当核酸模板在核酸聚合酶、引物和四个单脱氧碱基存在的情况下进行复制或转录时，如果是在四管反应系统中，则有四个双脱氧碱基按比例引入。 只要链端掺入双脱氧碱基，链就会停止延伸，而链端掺入单个脱氧碱基的片段可以继续延伸。 这样，在反应系统的每个试管中合成了一系列不同长度的核酸片段，其中公共引物为5'端，双脱氧碱基为3'端。 反应终止后，进行四泳道电泳。 为了分离不同长度的核酸片段（相邻片段的长度仅相差一个碱基），可以根据片段3'端的双脱氧碱基依次读取合成片段的碱基序列。

这有点复杂。 这可能意味着将 dNTP 和 ddNTP 的混合物添加到系统中。 遇到dNTP没关系，但是遇到ddNTP就停止。 有兴趣的朋友可以看下面两张图。

图1

图2

（图片来自：）

了解了大致原理后，您可以知道，我们产品的测序过程中，聚合酶在模板的引导下，不断地将dNTP添加到引物的3'-OH端，使引物延伸，合成新的互补DNA股。

所以！下次有人问你的时候，你可以直接告诉他

双脱氧终止法测序从引物 3' 末端后的第一个碱基开始。 没有测序引物序列~

那么，我们再讨论一下dnastar拼接序列，当你拿到公司发给你的测序结果，没有拼接的时候，你该怎么办？

首先第一步当然是问我为什么没有被拼接，以后会不会再被拼接。 毕竟时间就是金钱，朋友们，该偷懒的时候就可以偷懒啦~

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其次，我们还要懂得自己动手，才能丰衣足食。 寻求帮助比自求更好。 我们先来学习一下如何进行序列拼接吧~

——简易版()——

下载一个。 上一篇好像有下载地址。 我记不清了，或者你可以从百度下载。

脚步

导出只需点击它即可查看是或否。 获得所需的序列后，文件 -> 另存为 -> 选择保存格式。

——进阶版（之）——

它是分子生物学实验室常用的序列分析软件。 该软件由七个模块组成。 今天我要讲的就是其中的七分之一。 剩下的6个没看懂哈哈

主要用于多个序列的拼接。 它可以组装数千个序列（最多支持 64,000 个序列）。 同时，在拼接前dnastar拼接序列，可以对质量较差的序列进行修剪，去除自动测序的序列结果中的污染序列或载体序列。 ，提供完整的编辑和输出功能。

1.简单拼接，与上面提到的类似

这里需要注意的一点是：如果导入seq文件，只能看到序列结果； 如果导入ab1文件，可以看到序列+峰值图（推荐）

根据自己的需求选择即可

这里我选择了seq，但是我选错了，然后我重新选择了ab1文件。

然后点击左上角，就会得到拼接结果：

您可以根据峰值图手动校正序列。

最后一步是导出序列。

2.手动恢复自动更正的序列结束

根据迹线数据质量和矢量序列，在组装前自动进行端部修整

修剪当然很好，但是当我们想看到整个原始序列时：

找到小黑棒并拖动它

黄色底色部分为系统修剪部分

3.去除向量序列

在序列比对过程中，含有某些载体序列的测序结果有时会给我们带来麻烦，因此我们可以在拼接前去除载体序列，并对结果进行一定程度的优化。

其中，默认有一些向量序列：

检查系统中的向量序列

如果您使用的向量不可用，请自行添加

添加新运营商时的注意事项

最后，可以将其导出并与序列进行比较，而无需删除向量。

好吧，大致就是这样。 毕竟，有时公司有数百个订单。 如果你打电话请人帮你把它们放在一起，那就不值得花时间和愤怒。

学会了这些简单的方法后，妈妈再也不用担心我的序列拼接了。 祝大家的序列100%匹配，眨眼~

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