今天想写一篇关于载体构建的文章，每次写之前我都会去各个微信公众号看看自己想写的话题有没有在公众号里写过，有多少相关文章。浏览之后发现文章里有很多用于载体构建和引物设计的分子生物学软件，比如5.0、Oligo 6.0、3.0、NTI等。至于哪个最方便，最好用，并没有绝对的答案。

简单说一下PCR引物设计：

1.5、Oligo 6.0、3.0可能是最好的，因为它可以检测引物错配和引物Tm值，但是对于我们扩增固定序列来说不是那么方便，因为我们需要找到序列的开始和结束。

2、是专门针对DNA分析而设计的生物软件，该软件在国际上享有盛誉，不仅名气大，功能也强大，主要由7个模块组成，主要用于DNA和蛋白质序列分析、重叠组剪接和基因工程管理dnastar拼接序列，帮助用户实现DNA生物分析，支持蛋白质结构分析，里面的组合，还可以设计良好的PCR引物。

3、NTI软件包含丰富的模块，可以满足不同生物学研究者和学习者的需求。NTI 11可以对DNA、限制性内切酶、引物分析、蛋白质等生物数据进行细致的模拟和进化分析，可以有效细致地分析各种生物元素。当然，还可以设计PCR引物。

4.本软件旨在提供最快、最简单的方法来规划、可视化和记录您的分子生物学方法。它支持对限制性位点、标签、启动子、终止子和复制子等质粒元件的分析，并生成详细的DNA序列文件。它非常实用，可以在软件中完成所有克隆，优化和改进您的策略，快速创建质粒图谱，并提供优雅且信息丰富的窗口来模拟各种常见的克隆和PCR方法。它节省了大量的时间和金钱，易于操作的可视化和模拟，提前预测可能的错误，并提醒用户进行改进。在整个过程中，每个操作都会自动记录，以便用户可以清晰准确地看到您的所有操作dnastar拼接序列，并可以通过.dna文件与同事共享丰富的注释图谱和序列，并按名称、长度、颜色、结合位点、方向性或熔化温度对杂交引物列表进行排序。

介绍完了好像最好，字数最多，也是最后介绍的。但是我想说的是，在复杂序列的PCR引物设计上，可能还不够。根据我的经验，组合可以设计出更好的引物，特别是在特异性方面。因为它可以很好地分析序列内部的重复结构。

随后我在微信公众号里搜索相关文章，找到了几个在线引物设计和质粒构建的网站，分别是诺禾致源、全世金生物科技、宝生物科技。从微信文章的介绍来看，诺禾致源的软件很不错，打开软件后惊喜地发现它有不少功能（如下图）：

1. 入门引物设计；

2. 单片段克隆（二）引物设计；

3. 多片段克隆的引物设计（ ）；

4.单点突变（II）引物设计；

5. 双重/多重突变（II/）引物设计；

6. 重组反应中所用DNA量的计算程序；

7.DNA序列处理工具；

8.引物Tm值计算工具。

有兴趣的老师可以尝试一下的这款软件，今天介绍的几款软件中，NTI功能最全面，因为功能太多，很久没有跟大家分享它们的使用方法了，我只用了其中很小一部分，还在学习中，希望通过系统的学习，给大家最全面的介绍这两款软件的使用方法。

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