实验原理：

借助提取的DNA或cDNA作为模板，在实验室中设计基因片段特异性质粒并提取目的基因片段的过程称为基因克隆。

实验试剂：

质粒、DNA 模板、高保真酶 ()

实验步骤：

1. 设计工作

软件打开待克隆基因片段，在目标片段两侧设计正向质粒F和反向质粒R，将设计好的质粒送至公司合成。

2. 实验前试剂准备

从-20℃冰箱中取出质粒和DNA模板，涡旋混匀，离心备用。

3. 添加样品

按照试剂说明书，分别将DNA模板、引物、高保真酶、去离子水加入EP管中。 涡旋混合并离心。

4.上机

将离心后的PCR管放入PCR仪中，设置反应程序进行PCR反应。

5.检查

PCR反应完成后，将整个反应液进行琼脂糖凝胶电泳，并在成像系统中成像，初步检测相应基因片段是否提取成功。 结果大小符合预期dnastar引物设计，可以进行下一步凝胶回收实验。

防范措施：

1. DNA实验操作，EP管、移液器吸头等耗材需经高压蒸汽灭菌dnastar引物设计，去除DNase（无酶灭菌耗材除外）。

2、加样时应冰上操作，以保护酶，避免体温下降，使酶更早活化。

3、由于实验过程中存在致畸试剂，实验操作人员严格穿戴实验服和手套，确保自身安全。

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