最近，由于之前的测序公司又穷又马虎，本着“忍不住，常变，常新”的原则，决定换家试试。

在适应新公司的送样方式和测序结果等方面，学到了一些东西，这也是我明天要分享的两点：

1. 最常用的核苷酸测量技术：双脱氧终止法 2. 最实用的技巧：测序结果的序列拼接

首先，让我谈谈这种双脱氧悬浮法是如何引起我的注意的。

在看新公司测序软件的使用说明书时，听到这句话（蓝色的句子）：

想起有一次和老师或师兄们讨论实验时经常被批评：

为什么您的测序结果中缺少您的质粒序列？

这就要从双脱氧悬浮法的原理说起了……

具体来说，emm 等人。 1977年提出这种测序方法，其原理是：当核苷酸模板在核苷酸聚合酶、引物和四种单脱氧核苷酸存在下进行复制或转录时，如果进入四管反应体系，四种双脱氧核苷酸分别被按比例介绍。 只要双脱氧核苷酸并入链末端，链就停止伸长，而在链末端掺入单个脱氧核苷酸的片段可以继续伸长。 这样，在每个管式反应系统中，以共同引物为5'端，双脱氧核苷酸为3'端，合成一系列不同宽度的核苷酸片段。 反应终止后，进行四泳道电泳。 通过将不同长度的核苷酸片段分开（相邻片段之间的宽度仅相差一个核苷酸），根据片段3'端的双脱氧核苷酸，可以依次读取合成片段的核苷酸序列。

这有点复杂。 大致意思是在系统中加入dNTP和ddNTP混合物。 遇到dNTP不要紧，遇到ddNTP就停下来。 有兴趣的同学可以看下面两张图。

图1

图 2

（图片来自：）

了解原理后可以知道，我们产品在测序过程中，在模板的引导下，聚合酶不断将dNTPs加到质粒的3'-OH端，使质粒延伸，合成一条新的互补DNA链.

所以！上次有人责怪你，你可以告诉他

-stop测序从质粒3'端后的第一个核苷酸开始，没有质粒的序列~

之后再讨论一下，收到公司发给你的测序结果，但是没有拼接的那个怎么办？

首先第一步其实就是问你为什么不给我拼接，以后会不会拼接。 虽然时间就是金钱，各位小伙伴们，该偷懒的时候可以偷懒哦~

第一时间与销售沟通

其次，还要懂得自己做，丰衣足食，不求人，不求己。 先来学习下序列拼接吧~

-- 简单版 () --

下载一个，上一篇好像有下载地址，想不起来了，还是百度下吧。

脚步

导入是，是或不是，你点一下就知道了。 得到你想要的序列后，去文件——“”选择格式保存。

——进阶版（之）——

是分子生物学实验室常用的序列分析软件。 软件由七个模块组成，明天讲七分之一，剩下的六个模块我都不懂hhh

主要用于多序列的拼接，可拼接数万个序列（最多可达64000多个序列）。 同时，在拼接前，可以对人工测序的序列结果中质量较差的序列进行剪裁，剔除污染序列或携带序列。 ，提供内置的编辑和导出功能。

1. 简单的拼接，与前述类似

这里要注意一点：如果导出seq文件，只能看到序列结果； 如果导出ab1文件，可以听到序列+峰图（推荐）

大家可以根据自己的需要选择

这里我选择了seq，但是我选错了，重新选择了之前的ab1文件

然后点击左上角，得到拼接好的：

序列可根据电泳图自动校正

最后一步是导入序列。

2.自动恢复被手动修正的序列结尾

根据迹线数据和矢量序列的质量，可以在组装前手动修剪末端

修剪其实很好，当我们想看到原始的完整序列时：

找到小黑棒并拖放

底色为白色的部分为系统微调部分

3.向量序列的消除

在序列比对过程中，测序结果中富含某些载体序列dnastar拼接序列，有时会给我们造成混淆，因此我们可以在拼接前剔除载体序列，对结果进行一定程度的优化。

在 中，默认有一些向量序列：

查看系统中的向量序列

如果没有您使用的运营商dnastar拼接序列，请自行添加

添加新运营商时的注意事项

最后可以导入并与未清除的向量序列进行比较

OK，大致就是这样，虽然有时候公司有几千上百个订单，你打电话叫人给你拼接，浪费的时间和生气得不偿失。

学会了这个简单的方法，妈妈再也不用害怕我的序列拼接了。 祝大家100%序列匹配，wink~

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