只有套路，没有弯路！你好，我是小白

如果想要利用/Cas系统敲除基因，或者激活/抑制基因转录dnastar引物设计，就必须涉及到sgRNA的设计。 明天，两个sgRNA设计网站将处理所有序列的sgRNA设计！

说到这里，就必须要说到张峰大师了。 他自己建立的网站确实更新了很多功能。 然而不知为何，现在感觉繁琐多了dnastar引物设计，网站打不开。

那你就只能另寻他法了。 因为通常需要的sgRNA要么是已知基因的质粒设计，要么是非编码区的质粒设计。

1.已知基因的质粒设计，推荐使用网站：

1、我们以小鼠Setd2为例，使用Cas9对其进行激活表达。

2、选择相应选项后，点击，稍等片刻，点击下载结果。

3. 下载.txt 格式文件。 用 Excel 打开它。 红框内为Cas9系列。 基于载体引物（通常为BbsI）的限制性位点，将序列添加核酸内切酶的粘端，合成质粒，固溶后即可与载体连接。

2.非编码区的质粒设计，推荐使用网站：

1. 将设计质粒的序列复制到框中。 这是一个随机基因组的示例作为演示：

2. 点击后，等待一段时间，然后选择排名靠前的sgRNA进行质粒合成。

这两个网站基本可以涵盖所有关于sgRNA的质粒设计，无论你是已知基因还是非编码区，都可以搞定！

每次链接到外部链接时，都不会通过初审。 。 。 如果需要链接可以私信或者自行百度。

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