发布时间:2026-01-19
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对于常规基因表达量的qPCR检测而言,首要的事情是设计出一对具备特异性的检测引物,接下来,如期生物以人的“FAU1”基因为示例,给大家简要地介绍一下,若要使用NCBI这个网站来设计qPCR该如何操作,。
点开NCBI网站,其网址为https://www.ncbi.nlm.nih.gov/ ,呈现出的界面是这样的 。
在NCBI搜索栏的下拉框那儿选择“Gene”,于输入框当中输入对应的物种以及基因信息,然后点击“”键去进行搜索,情况如下所示 。
3.点击“”后,跳转到如下界面;单击对应的基因项
4.点击基因名称后,跳转到如下界面;拉到底部转录本位置
5.如下图,选择需要检测的转录本;并单击
6.如下图,单击“pick ”
修改设计参数中的“PCR size”,将其设定在70至150bp就行,要是太长就会对扩增效率产生影响 ;“Exon span”,选定可跨外显子以排除基因组污染干扰的选项,然而当今市面上好多反转录试剂皆带有去除基因组的步骤dnastar引物设计,所以即便不设置该选项也是可行的 ;对于“”选项dnastar引物设计,选择RNA便可 ;最终参数设定如下,其他参数保持默认设置就行:
在8这个数字处,点击名为“get ”的选项,等待数据库完成匹配之后,会出现如下这样的界面:
9. 接着,挑选GC百分比处于45%至55%范围之内的引物,还要选择Tm大概在60℃的引物,之后对复制序列合成予以验证特异,这样之后就能够用于qPCR检测了。
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成立于2016年的广州如期生物技术有限公司,始终把探索科学以及服务客户当作自己的责任,致力于给高校、科研院所、医院、制药企业提供全面又便捷且专业的技术服务与产品,在技术方面专注于生物医学领域,公司有着完善的技术服务平台,覆盖分子生物学、转录组学、代谢组学、蛋白组学、表观遗传等多个科研平台。于产品范畴内,自主开展了多种类别的科研试剂盒研究工作,数量达20多项,像COIP科研检测试剂盒、CHIP科研检测试剂盒、RIP科研检测试剂盒等,相较于同类型的进口试剂盒,科研成本被极大地降低了。
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