分子诊断是IVD中增长最快的子行业，与美国的技术差异最小。 分子诊断技术有多种类型，目前最成熟、应用最广泛的一种是PCR。 下面简单介绍一下PCR中最常用的突变阻断扩增系统。

ARMS的英文名称是突变阻断扩增系统（ARMS），也称为等位基因特异性PCR（-PCR、AS-PCR）。 基本原理是，当质粒的3'端核苷酸与模板完全互补时，质粒才能正常延伸。 如果质粒的3'端核苷酸与模板核苷酸不互补，则存在错配，质粒延伸受到抑制甚至完全终止。

在基因检测中，ARMS原理可用于扩增目标序列dnastar引物设计，同时防止非目标片段的扩增。 这些非目标片段的扩增在PCR中一般称为非特异性。 非特异性很容易导致检测结果出现假阴性，对基因检测结果的分析产生不利影响。

为了抑制这些非特异性，一般将ARMS质粒3'端最后一个核苷酸设置为与突变核苷酸互补，并且最后一个质粒与野生型模板之间存在错配。核苷酸，由于错配，在野生型模板存在的情况下，扩增效率很低甚至不进行扩增。 在实际工作中，由于质粒与野生型模板之间只有一处核苷酸错配，因此大多数情况下野生型模板也能被扩增，即出现非特异性。

为了提高质粒的特异性，可以在3'端底部第二个或第三个核苷酸处引入额外的错配核苷酸，使质粒能够正常扩增目的序列，但非目的片段会被扩增。不被放大。 3'端核苷酸错配根据其硬度可分为强错配（G/A、C/T、T/T）、中度错配（A/A、G/G、C/C）和弱错配。 与（C/A，G/T）。 如果3'端是“强错配”，则需要引入“弱错配”； 如果3'端是“弱不匹配”，则需要引入“强不匹配”。

2. 提高ARMS质粒特异性的途径

然而，除了单个质粒3'端的错配之外，引入额外的错配并不能完全抑制非特异性扩增。 尤其是体外诊断试剂的研发，对特异性要求较高，需要采用其他方法来提高特异性。

1. 提高PCR程序的固溶温度。 通常，固溶温度与特异性之间存在如下关系：固溶温度越高，特异性越好； 固溶温度越低，特异性越差。 通过梯度PCR设定3～5个不同的固溶温度，选择最合适的PCR固溶温度。

2. 添加PCR增强剂。 一些PCR增强剂，例如硫酸四乙铵，可以提高质粒和模板的特异性。 通常PCR反应液中的最终含量为10~50mM。 不同质粒最适合的剂量不同，具体应用需要根据实验进行调整。 优化。

3.PCR技术。 通过在PCR系统中添加序列来抑制野生型基因的扩增，从而提高PCR的特异性。 它是人工合成的单链核酸序列。 与质粒最大的区别在于其3'OH被3'-C3、3'-、3'-ddC、3'-End修饰。 由于其3'OH被封闭，不能参与PCR的延伸反应。 在PCR固溶阶段，序列与野生型模板完全互补，这阻止了PCR质粒进一步与野生型模板结合。 然而，序列和突变模板之间存在核苷酸不匹配。 在PCR过程中，将优先考虑PCR质粒。 与突变模板互补配对。

值得一提的是，PNA钳（PNA）也是目前广泛应用的PCR技术。 PNA 是一种合成聚合物。 与DNA与DNA之间的键合相比，PNA与DNA之间的键合更加可靠。 PNA可以特异性地与野生型模板结合，使得野生型模板不能作为扩增的模板。 然而，由于突变模板中存在核苷酸错配，PNA不能与其结合，因此突变模板可以用于PCR扩增。

在产品设计开发过程中，如果对产品特异性要求非常严格，特别是在开发一些癌症靶点抗生素突变基因检测产品时，质粒特异性一般不能直接满足产品设计要求。 在具体的应用过程中dnastar引物设计，需要结合以上几种方式来提高系统的专用性。 事实上，对于不同的模板序列和不同的突变类型，具体方法的应用效果是有很大差异的。 因此，具体功效仍需实验验证。

三、总结

事实上，ARMS PCR 具有很高的灵敏度，可以测量低至 1% 的突变； 成本低，PCR系统中的质粒探针可商业化定制。 对于工业客户来说，合成成本更低； 操作简单，时间快，通常2小时内即可得出测试结果。 事实上，也有其固有的缺点。 其测量通量较低，仅适合测量单个基因或少数基因突变位点。 它只能检测已知的突变，不能测量未知的突变。 即便如此，我们也不得不承认，是目前分子诊断产品中应用最广泛的技术，没有之一。

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